Практикум з мікробіології 1
ПЕРЕЛІК ПРАКТИЧНИХ НАВИЧОК
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Організація робочого місця»
Алгоритм
Оснащення Спиртівка, предметні та покривні скельця, банка з ватою,
банка з інструментами (пінцетом, ножицями, скальпелем,
бактеріологічною петлею), склянка з дезінфекційним
розчином для піпеток, для відпрацьованих предметних
скелець, Невелика склянка з притертою кришкою для
накривних скелець, сірники, маркери, гумова груша, 70%
розчин етилового спирту для обробки рук, пробірки з
ізотонічним розчином натрію хлориду, штатив з пробірками,
чашки Петрі, мікроскоп, імерсійні масла.
Послідовність дій при
«Організації робочого місця»
1. Всі робочі предмети розмістити на столі так, щоб
середина була вільною.
2. Дезінфекційний розчин для оброблення рук, ємність
для піпеток, банку для відходів поставити праворуч від
працівника.
3. Спиртівку поставити в центрі стола на відстані 30см від
його краю.
4. Об’єкти з посівами, не засіяні поживні середовища
розмістити ліворуч на однаковому рівні зі спиртівкою.
5. Після закінчення роботи всі поживні середовища,
прилади і інструменти прибирають на відведені для них
місця в лабораторії.
6. Стіл після виконаних робіт протирають дезінфекційним
розчином.
7. Для фарбування мазків обладнують спеціальне місце.
8. Для фарбування використовують фарби, спирт, пісочні
годинники, промивалку з дистильованою водою,
ємність із місточком,пінцет,фільтрувальний папір.
Практикум з мікробіології 2
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Виготовлення мазків з мікробної культури»
Алгоритм
Оснащення Агарова культура, фізіологічний розчин, предметні скельця,
пінцет, бактеріологічна петля, спиртівка, сірники.
Послідовність дій при
«Виготовлені мазків з
мікробної культури»
1. Підготуйте предметне скло, нанесіть контури майбутньо-
го мазка.
2. Переверніть скло (нанесений контур знизу).
3. У лівому верхньому куті скла поставте свій номер.
4. Зафламбуйте скло у полум’ї спиртівки (скло тримати
пінцетом).
5. Зафламбуйте бактеріологічну петлю.
6. Нанесіть краплю стерильного ізотонічного розчину
натрію хлориду на предметне скло.
7. Зафламбуйте бактеріологічну петлю.
8. Відкрийте лівою рукою чашку Петрі з ростом культури
мікроорганізмів.
9. Притуліть бактеріологічну петлю до стінки чашки Петрі
(охолодження петлі).
10. Візьміть петлею матеріал з однієї колонії;
Увага! Слід брати колонію мікроорганізмів, а не агар!
11. Закрийте чашку Петрі;
12. Нанесіть матеріал на суху поверхню скла поряд із краплею
ізотонічного розчину натрію хлориду, розітріть;
13. Рівномірно розмішайте матеріал із краплею ізотонічного
розчину натрію хлориду;
14. Зафламбуйте бактеріологічну петлю;
15. Залишіть мазок для висихання
Увага! Мазок має бути тонким, прозорим, рівномірним,
невеликим
Послідовність дій при
«Фіксації мазка фізичним
способом»
1. Візьміть пінцетом предметне скло з висушеним мазком;
2. Проведіть тричі через верхню частину полум’я спиртівки;
3. Доторкніться нижньою поверхнею скла до тильної сторони
лівої руки (перевірка правильності фіксації).
Увага!
Забороняється залишати на відкритих місцях або в не
опечатаних сховищах незафіксовані мазки після закін-
чення роботи!
Практикум з мікробіології 3
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Виготовлення мазків з крові, гною, харкотиння»
Алгоритм
Оснащення Вязкий матеріал (мокротиння або гній), кров,
Послідовність дій
«Виготовлення мазків з
крові, гною, харкотиння»
1. Підготуйте 2 предметних стекла (одне з них повинно бути
вужчим і мати шліфований вузький кінець).
2. Поставте свій номер на ширшому склі.
3. Нанесіть краплю крові пастерівською піпеткою на ширше скло
ближче до правого кінця; поставте друге скло шліфованим
кінцем у краплю крові, нахиліть його вправо під кутом 45°.
4. Проведіть ним по першому склу справа наліво на 3/4 скла
(див. мал. ).
5. Опустіть вузьке скло в дезінфекційний розчин.
6. Залиште мазок на столі для висихання.
Увага! Правильно виготовлений мазок повинен мати світло-
рожеве забарвлення і бути рівномірним за товщиною.
Виготовлення мазка із мокротиння
Практикум з мікробіології 4
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Фарбування препаратів простим методом»
Алгоритм
Оснащення Мазок, піпетка, посудина для
фарбування, фуксин Пфейфора,
метиленовий синій, вода,
фільтрувальний папір, гумові рукавички
Послідовність дій при «Фарбуванні препаратів
простим методом»
1. Помістіть препарат на підставку в
посудину для фарбування.
2. Нанесіть барвник піпеткою так,
щоб він закрив весь препарат.
3. Проконтролюйте термін дії
барвника (фуксин Пфейффера — 1—
2 хв, метиленовий синій — 3—5 хв).
4. Промийте препарат водою.
5. Висушіть препарат
фільтрувальним папером.
Практикум з мікробіології 5
Практикум з мікробіології 6
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Фарбування препаратів за методом Грама».
Алгоритм
Оснащення Мазок, піпетка, посудина для фарбування,
фуксин Пфейфора, папірці, пофарбовані за
Синьовим, розчин Люголя, 96% етиловий спирт,
фільтрувальний папір, пуста чашка Петрі, вода,
гумові рукавички
Послідовність дій при “Фарбуванні за
Грамом”
1. Покладіть на мазок папірець,
пофарбований за Синьовим, змочіть його
водою — 2—3 краплі, витримайте 2 хв.
2. Зніміть папірець пінцетом, нанесіть розчин
Люголя — 1 хв (до почорніння).
3. Нанесіть 96 % етиловий спирт — 20—30c
4. Промийте водою.
5. Нанесіть фуксин Пфейффера на 1—2 хв.
6. Промийте водою.
7. Висушіть препарат фільтрувальним
папером.
Практикум з мікробіології 7
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Мікроскопія забарвлених препаратів»
Алгоритм
Оснащення Світловий мікроскоп, імерсійне масло, мазок.
Послідовність дій при
“Мікроскопії забарвлених
препаратів”
1. Нанесіть краплю імерсійного масла на препарат.
2. Покладіть препарат на предметний столик.
3. Переведіть об’єктив з малого збільшення на велике (х90
МІ).
4. Опустіть обережно об’єктив макрогвинтами у краплю
імерсійного масла (дивитися збоку).
5. Піднімайте повільно об’єктив макрогвинтами, доки не
з’явиться зображення (дивитися в окуляр).
6. Встановіть чіткість зображення за допомогою
мікрогвинта.
7. Визначте форму мікроорганізмів, їх розміщення, наяв-
ність у них спор і капсул.
8. Підніміть тубус макрогвинтами.
9. Зніміть препарат з предметного столика.
Практикум з мікробіології 8
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Визначення морфології основних груп мікроорганізмів»
Алгоритм
Оснащення Світловий мікроскоп, імерсійне масло, набір пофарбованих
препаратів промислового виготовлення
Послідовність дій при
«Визначенні морфології
основних груп
мікроорганізмів»
1. Розглянути препарати і визначити форми бактерій:
кулясті (кокки), паличкоподібні (бацили), звивисті
(спірили), нитчасті (актиноміцети)
2. Розглянути препарати пофарбовані за Грамом;
визначити грампозитивні (набувають синього
забарвлення) і грамнегативні (набувають червоного
забарвлення).
3. Для виявлення капсул препарат фарбують за Буррі—
Гінсом.(збудники пневмонії – Stafilococcus pneumonia,
сибірки, чуми) .
Практикум з мікробіології 9
4. Для виявлення мікобактерій туберкульозу, лепри, а
також деяких актиноміцетів застосовують фарбування
препарату за Цілем—Нільсеном.
Для виявлення спор (ботулізм, правець, сибірка) препарат
фарбують за Ожешко.
5. Для виявлення включень (зерна волютину у
коринебактерій дифтерії) препарат фарбують за
Нейссером.
Практикум з мікробіології 10
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Висівання на поживні середовища петлею,
шпателем, тампоном»
Алгоритм
Оснащення Агарова культура, бактеріологічна
петля,шпатель, пробірки з тампонами,спиртівка,
сірники
Послідовність дій при “Посіві на щільне
поживне середовище бактеріологічною
петлею”:
1. Поставте чашку Петрі донизу дном зліва від
спиртівки;
2. Зафламбуйте бактеріологічну петлю,
візьміть матеріал для посіву із пробірки;
Увага!
Матеріал для посіву в кільці бактеріологічної
петлі утворює плівку “дзеркальце”.
3. Підніміть правою рукою кришку чашки
Петрі так, щоб в щілину між кришкою та її
дном пройшла бактеріологічна петля;
4. Втирайте патологічний матеріал
бактеріологічною петлею в поверхню
поживного середовища біля краю чашки;
5. Зафламбуйте бактеріологічну петлю;
6. Охолодіть бактеріологічну петлю,
доторкнувшись її кінцем до внутрішньої
сторони стінки чашки Петрі;
7. Покладіть бактеріологічну петлю на те
місце на поверхні середовища, де нанесли
патологічний матеріал;
8. Продовжіть робити посів штрихами по всій
поверхні чашки, не відриваючи петлі від
середовища;
Увага!
Штрихи наносять через всю поверхню
середовища від однієї стінки чашки до
іншої (протилежної) і розташовують їх
якомога ближче один від одного. Завдяки
цьому лінія посіву стає якнайдовшою, що
дає змогу отримати ізольовані колонії.
9. Закрийте чашку Петрі;
10.Зафламбуйте бактеріологічну петлю,
поставте її в банку; —- закрийте спиртівку;
11.Підпишіть на кришці чашки назву
поживного середовища і дату його
виготовлення;
12. Переверніть чашку дном догори, підпишіть
Практикум з мікробіології 11
номер, дату посіву, назву культури за бінарною
номенклатурою.
Увага! Увага! Підпис посуду здійснюється
відповідно до Державних санітарних
правил (ДСП 9.9.5.-080-02).
Послідовність дій при “Посіві у рідке
поживне середовище бактеріологічною
петлею”:
1. Візьміть бактеріологічну петлю в праву руку,
зафламбуйте її.
2.Візьміть чашку Петрі з культурою у ліву руку.
3.Охолодіть петлю, доторкнувшись до
внутрішньої стінки чашки.
4.Заберіть матеріал з однієї колонії.
5.Поставте чашку Петрі, візьміть пробірку з
МПБ.
6.Візьміть мізинцем правої руки пробку
пробірки і притисніть її до долоні, пробку
постійно тримайте в руці.
7.Зафламбуйте отвір пробірки.
8.Тримайте пробірку біля полум’я так, щоб
отвір її був не далі як на 10 см від полум’я.
9.Уведіть петлю в пробірку, розітріть на її
стінці матеріал.
10.Опустіть петлю в поживне середовище,
змийте матеріал зі стінки пробірки.
11.Вийміть петлю з пробірки, не торкаючись її
стінок.
12.Зафламбуйте отвір пробірки, закрийте її
пробкою.
13.Поставте пробірку у штатив.
14.Зафламбуйте петлю, поставте її в склянку з
інструментом.
Послідовність дій при проведення посіву
шпателем Алгоритм “Проведення посіву шпателем”:
1. підпишіть чашку Петрі з ЕМС;
2. нанесіть на поверхню середовища піпеткою
чи бактеріологічною петлею одну краплю
посівного матеріалу або тампоном на
сегмент 1×2;
3. візьміть у праву руку шпатель (тримайте
його як олівець), зніміть з нього папірець,
швидко зафламбуйте шпатель;
4. покладіть його на нанесену краплю
посівного матеріалу на поверхні поживного
середовища;
5. зробіть посів шпателем (робіть шпателем
колові рухи правою рукою, прокручуйте
чашку лівою рукою);
Увага!
За такого методу посіву отримують
рясний ріст мікроорганізмів по всій
поверхні поживного середовища. Такий
посів називається суцільним, або посів
газоном.
Практикум з мікробіології 12
6. закрийте чашку, поставте її догори дном;
7. опустіть шпатель у дезінфекційний розчин.
Послідовність дій при “Посіві тампоном на
пластинчасті середовища”
1. Підпишіть чашку Петрі з середовищем
ЖСА (на кришці — назву середовища і дату
виготовлення, на дні — номер аналізу,
назву культури, дату посіву).
2. Запаліть спиртівку, поставте ліворуч від
неї підписану чашку Петрі із середовищем
ЖСА дном догори.
3. Візьміть тампон у праву руку.
4. Візьміть чашку із середовищем ЖСА у
ліву руку, піднесіть її до полум’я не далі ніж
на 10 см.
5. Зробіть посів тампоном
зигзагоподібними штрихами.
6. Закрийте чашку.
7. Закрийте спиртівку.
8. Опустіть тампон у пробірку.
Практикум з мікробіології 13
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Характеристика росту мікроорганізмів на поживних
середовищах».
Алгоритм
Оснащення Агарова культура, фізіологічний розчин, предметні
скельця, бактеріологічна петля, спиртівка, мікроскоп
Послідовність дій “Визначені
культуральних властивостей
мікроорганізмів на
пластинчастих середовищах».
1. Візьміть чашку Петрі у ліву руку, тримайте її проти
джерела світла на рівні очей дном до себе;
2. Відмітьте маркером ізольовану колонію;
3. Опишіть ознаки цієї колонії;
4. Визначте у проникаючому світлі розмір, форму
колонії, контур краю, прозорість;
5. Покладіть чашку Петрі на ліву руку дном донизу;
6. Розгляньте колонію у відбитому світлі, визначте
рельєф, характер поверхні, колір;
7. Покладіть чашку на предметний столик мікроскопа
догори дном, встановіть об’єктив х8, опустіть
конденсор, визначте структуру колонії;
8. Визначте консистенцію колонії, торкнувшись до неї
бактеріологічною петлею.
Увага! Консистенцію колонії найчастіше визначають під
час виготовлення мазка або пересіванні культури.
Практикум з мікробіології 14
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
Визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків
методом паперових дисків
Алгоритм
Оснащення Агарова культура,стандартне поживне
середовище,фізіологічний розчин, набір паперових дисків
з антибіотиками промислового виробництва,пінцет,
Послідовність дій 1. Поставте чашку Петрі з поживним середовищем із
злегка відкритоою кришкою для підсушування (на 30-40
хв), потім закрийте чашку кришкою.
2. Підготуйте культуру мікроорганізмів (інокулянт) до
посіву.
3. Підпишіть чашку Петрі (вкажіть назву середовища,
номер аналізу, назвуу культури, дату посіву).
4.Розведений інокулянт (суспензія чи бульйонна культура
мікроорганізмів) в об’ємі 1-2 мл наносять піпеткою на
поверхню середовища і похитуючи чашку рівномірно
розподіляють по всій поверхні середовища.
5.Поставте чашку зі злегка відкритою кришкою для
підсушування поверхні середовища за кімнатною
температурою протягом 10-15 хв., потім закрийте чашку
кришкою.
6. Поставте чашку донизу дном біля спиртівки.
7.Візьміть у праву руку пінцет, зафламбуйте його.
8. Візьміть у ліву руку флакон з дисками, зніміть з нього
пробку мізинцем правої руки, зафламбуйте отвір флакона.
9. Візьміть пінцетом один диск, зафламбуйте отвір
флакона, закрийте його пробкою, поставте на стіл.
10.Лівою рукою злегка підніміть кришку чашки й
покладіть диск на поверхню середовища на відстаніі 2 см
від краю чашки, придавіть його злегка бланшами пінцета.
11. Накладіть рівномірно інші диски.
Увага! На одну чашку кладуть не більше 6 дисків!
Увага! Чашки тримайте біля полум’я на відстані не далі ніж
10 см. Пінцет фламбуйте кожного разу перед тим, як
узяти новий диск; при накладанні наступних дисків
чашку обертайте так, щоб зручно було накладати
диски; дотримуйтеся вимог асептики.
12.Поставте чашки в термостат догори дном
13. Культивують мікроорганізми за температури 35-37 С
протягом 18-20 годин.
Практикум з мікробіології 15
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
Врахування результатів антибіотикограм
Оснащення Агарова культура мікроорганізмів з паперовими дискаи,
лінійка, таблиці
Послідовність дій Чашки Чашки
ставлять
догори дном на
темну матову
поверхню
або тримати
чашку проти
джерела
світла.
Лінійкою
вимірюють
діаметр
зони затримки
росту
мікроорганізмів з точністю до1 мм, включаючи діаметр дисків.
Результати оцінюють за таблицею,
Алгоритм
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Виготовлення дезінфекційних розчинів»
Оснащення Дезінфікаційні засоби: хлорне вапно, хлорамін; терези,
важки, мірний посуд, емальоване відро з кришкою,
бутель з темного скла об’ємом 10л, флакони, банки
фафорові, лійка, вода.
Розрахунки Розрахунки проводять за формулою:
Х = 25 : А,
де Х- маса сухого хлорного вапна, кг;
А – вміст активного хлора, %.
Якщо вміст активного хлору становить 25%,
то для виготовлення 10л 10% основного насиченого
розчину треба взяти 1кг сухого хлорного вапна; якщо
вміст активного хлору 30%, то беруть (25:30=0,833кг)
833г сухого хлорного вапна, а при вмісті активного
хлору 20% беруть (25:20=1,25кг) 1кг 250г сухого
хлорного вапна.
Послідовність дій при
«Виготовленні основного
насиченого розчину
хлорного вапна»
1. Розрахуйте, яку кількість хлорного вапна треба
взяти для виготовлення розчину.
2. Зважте на терезах потрібну кількість сухого
хлорного вапна.
3. Висипте зважене хлорне вапно в емальоване
відро.
4. Відміряйте 10л холодної водопровідної води.
Практикум з мікробіології 16
5. Додайте в емальоване відро близько 1л
відміряної води.
6. Розмішайте деревяною лопаткою до однородної
маси.
7. Вливайте в емальоване відро при постійному
перемішуванні всю відміряну воду.
8. Закрийте емальоване відро кришкою, поставте в
темне прохолодне місце на 1 добу.
9. Злийте обережно (через добу) відстояний
розчин у бутель з темного скла, щільно закрийте
деревяною пробкою.
10. Підпишіть назву дезінфікаційного засобу,
концентрацію, призначення, дату виготовлення.
Увага! Основний 10% розчин хлорного вапна придатний для
використання протягом10 діб!
Послідовність дій при
«Виготовлені робочих
розчинів хлорного вапна»
1. Зробіть відповідні розрахунки.
2. Налийте в емальоване відро потрібну кількість
10% насиченого розчину хлорного вапна.
3. Додайте потрібну кількість холодної
водопровідної води, перемішайте.
4. Розлийте виготовлений розчин у банки для
дезінфікування предметних скелець, піпеток,
шпателів.
Концентрація
робочих розчинів,%
Обєм основного 10%
розчину для
виготовлення 10л
робочого розчину, мл
0,2 200
0,5 500
1,0 1000
3,0 3000
5,0 5000
10,0 Основний розчин
5.
Послідовність дій при
«Виготовлені розчину
хлораміну»
1. Зробіть відповідні розрахунки
2. Зважте потрібну масу хлораміну, висипте його
в скляну чи фарфорову ємність.
3. Відміряйте холодну водопровідну волу, вилийте
її в ту саму ємність.
4. Розмішайте до повного розчинення хлораміну.
5. Закрийте щільно ємність.
6. Підпишіть назву дезінфікаційного засобу,
концентрацію його, призначення (для
дезінфікування поверхонь робочих столів), лату
виготовлення.
Практикум з мікробіології 17
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Дезінфекція рук, робочого місця, інструментарію,
піпеток, відпрацьованого матеріалу тощо.»
Оснащення 1 Стерильні: ватні кульки, 1% і
5%розчини хлораміну
Послідовність дій
«Дезінфекція рук»
1.Зробіть із вати дві кульки діаметром 1—2 см;
2.Візьміть пінцетом одну кульку, змочіть її у
розчині дезінфектанту;
3.Протріть нею руки в такій послідовності: ліва
рука — тильна сторона, долонна сторона, між
пальцями, нігтьова пластинка, під нігтями;
права рука — у такій самій послідовності;
4.Кульку опустіть у посудину з дезінфекційним
розчином;
5.Візьміть пінцетом другу кульку і все
повторіть;
6.Вимийте руки водою з милом;
7.Висушіть руки, змастіть їх кремом для рук.
Послідовність дій
«Дезінфекція робочого місця»
1.Зробіть із вати кульку діаметром 2 см;
2.Візьміть пінцетом кульку, змочіть її в 3%
розчині хлораміну.
3.Протріть цією кулькою поверхню стола.
4.Кульку опустіть у посудину з дезінфекційним
розчином;
5. Витріть стіл вологою серветкою.
Послідовність дій
«Дезінфекція інструментарію,
піпеток, відпрацьованого
матеріалу»
1.Градуйовані, пастерівські піпетки, шпателі,
металеві інструменти опускають в ємність з
дезінфекційним розчином – 1% розчин
хлораміну на 30 хвилин.
2.Відпрацьований патматеріал (кал, сечу,
мокротиння, кров, спинномозкову рідину)
засипають сухим хлорним вапном із розрахунку
200 г дезінфекаційного засобу на 1 кг виділень,
перемішують і витримують 1 годину.
3.Мокротиння з підозрою на туберкульоз
знезаражують 5% розчином хлораміна на
протязі 6 годин, а посуд занурюють в 1%
розчин хлораміну на 1 годину або в 1 % розчин
МедіДес чи Тетраліну на 60 хв.
4.Робоче місце після закінчення роботи
протирають ганчіркою, змоченою
дезінфекційним розчином (0,2 % розчином Сеп-
таміну, 0,75 % розчином МедіДес чи
Тетраліну).
Практикум з мікробіології 18
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Миття лабораторного посуду».
Оснащення Новий посуд – чашки Петрі, пробірки;
знезаражений забруднений посуд –
чашки Петрі, пробірки, піпетки,
предметні стекла; мийні засоби, йоржі,
вимитий і висушений посуд,
Послідовність дій при «Митті нового
лабораторного посуду»
1. Налийте в емальований таз
теплої води.
2. Додати невелику кількість
мийного засобу, перемішайте.
3. Занурте у цей розчин посуд
(чашки Петрі або пробірки).
4. Поставте таз на слабкий вогонь
доведіть розчин до кипіння,
витримайте 15хвилин після
закіпання.
Увага! Мийні засоби видаляють бруд і
знежирюють скло.
5. Зніміть таз з вогню, дайте йому
охолонути, змийте мильний
розчин, промийте посуд чистою
водопровідною водою.
6. Занурте посуд в 1-2% теплий
розчин хлоридної кислоти.
7. Поставте таз на вогонь,доведіть
розчин до кипіння, витримайте
10-15 хв після закіпання.
Увага! Хлоридна кислота нейтралізує основу,
що залишається після виготовлення
скла.
Увага! Не можна вживати кислоту під час
миття посуду, який застосовується
для імунологічних реакцій. Це може
призвести до хибних результатів!
8. Зніміть таз з вогню, дайте йому
охолонути.
9. Змийте розчини кислоти,
промийте один раз
водопровідною водою й двічі –
дистильованою.
Увага! Із знежиреного скла вода стікає
рівномірно й не утворює крапель
на його поверхні!
10. Висушіть чистий посуд
(вимитий посуд не витирають)
Практикум з мікробіології 19
Увага! Для висушування чашки Петрі
розміщують на столі; пробірки
ставлять догори дном; а піпетки – в
ємність дно якої вистиляють чистою
серветкою; флакони розміщують на
сушильній дошці й висушують за
кімнатної температури. Посуд можна
висушувати в сушильній шафі за
температурою 100-105 С
Послідовність дій при «Митті
лабораторного посуду, що був у
використанні»
1. Очистіть посуд від залишків
поживного середовища ( рідке –
зливають, агарове видаляють
шпателем).
2. Занурте посуд у теплу воду з
мийним засобом, вимийте
йоржиком.
Увага! Посу, забруднений жиром, спочатку
заливають хромовою сумішшю на 30-40
хв.!
3. Промийте посуд один раз
водопровідною водою й двічі –
дистильованою.
4. Покладіть посуд для
висушування.
Послідовність дій при «Миття
градуйованих піпеток нових
1. Налийте в емальоване відро
(посуд повинен бути глибокий,
на довжину піпеток) теплу воду,
добавте небагато мийного
засобу, розмішайте до повного
розчиненя мийного засобу.
2. Заповніть кожну піпетку теплою
мильною водою, користуючись
гумовою грушею.
3. Залиште піпетки у цій воді в
стоячому положенні.
4. Витримайте 20-30хв.
Увага! Рівень води у відрі повинен бути трохи
вищим за довжину піпеток!
5. Промийте піпетки
водопровідною водоюююююю.
6. Перенесіть їх в інший посуд з 1-
2% розчином НСІ.
7. Поставте посуд на слабкий
вогонь, прокип’ятіть 10-15 хв.,
дайте охолонути.
8. Промийте один раз
водопровідною водою, двічі –
дистильованою.
9. Поставте для висушування.
Практикум з мікробіології 20
Послідовність дій при «Митті
градуйованих піпеток, що були у
використанні»
1. Намотайте жмутик вати чи
марлі у вигляюі сливи на
кінчик сталевої тоненької
проволоки, довжина якої
більша за довжину піпетки.
2. Опустіть піпетку в теплу
мильну воду й промийте її
зробленим тампончиком.
3. Прочистіть піпетки ман
дреном від тонких голок
шприців.
4. Складіть промиті піпетки в
емальоване відро, залийте їх
теплою мильною водою.
5. Поставте відро на вогонь,
прокип’ятіть 20-30 хв, дайте
йому охолонути.
6. Промийте один раз
водопровідною водою й двічі
– дистильованою
7. Поставте для висушування.
Увага! Чистий і висушений посуд оглядають
проти світла. Скло повинно бути
прозоре, без матових плям.
Послідовність дій при «Митті предметних
скелець нових»
1. Вимийте скельця в теплій
воді.
2. Промийте один раз
водопровідною водою, двічі –
дистильованою.
3. Висушіть скельця.
4. Помістіть сухі чкельця в
склянку з широким горлом,
залийте їх сумішшю
Нікіфорова, закрийте
кришкою (суміш легко
випаровується).
Послідовність дій при «Митті предметних
скелець, що були використані»
1. Опустіть знезаражені
предметні скельця в
хромову суміш,
витримайте 2 год.
2. Зливайте хромову суміш в
іншу ємність.
3. Промийте скельця
водопровідною водою.
4. Заливайте скельця 5%
розчином натрію
гідрокарбонату.
5. Поставте ємність зі
скельцями на вогонь,
прокип’ятіть 30-40 хв,
дайте охолонути.
6. Залийте скельця 5-10%
розчином хлоридної
кислоти, витримайте 10-
15хв.
7. Промийте один раз
Практикум з мікробіології 21
водопровідною водою,
двічі – дистильованою.
8. Висушіть скельця.
9. Помістіть скельця в
склянку з широким
горлом, залийте їх
сумшшю Нікіфорова,
закрийте кришкою.
ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
«Стерилізація, контроль за якістю стерилізації за
допомогою хімічних і біологічних тестів».
Алгоритм
Оснащення
Послідовність дій «При роботі
із сушільною шафою»
1. Перевірте, чи заземлена сушільна шафа.
2. Підключіть її до електромережі.
3. Увімкніть сушільну шафу жа допомогою
тумблера
4. Установіть потрібну температуру за
допомогою ручки.
5. Покладіть у робочу камеру матеріал.
6. Спостерігайте за показаннями термометра.
7. Зазначте час, коли показання термометра
досягли потрібної температури, витримайте
потрібний термін для стерилізації.
8. Вимкніть тумблер, відключіть апарат від
електромережі, дайте йому охолонути.
9. Відкрийте дверцята, вийміть
простерилізований матеріал.
10. Сухожарова шафа використовується для висушування лабо-
раторного посуду за температури 100—105 °С, а також для сте-
рилізації медичного інструментарію за 160 °С протягом 150 хв або
за 180°С — 60 хв.
11.
Послідовність дій «При
контролі за якістю стерилізації
за допомогою хімічних
тестів».
1. Підготувати для контролю якості
стерилізації кристалічні хімічні речовини з
певною температурою плавлення:
бензонафтол — 110 °С, антипірин — 113 °С,
резорцин, сірка — 119 °С, бензойна кислота,
бета-нафтол — 120 °С, сечовина, фенацетин,
манноза— 132 °С, саліцилова кислота,
стрептоцид — 160 °С, тіосечови-на, альбуцид
— 180 °С.
2. Одну з цих речовин змішати із невеликою
кількістю барвника (фуксину або
метиленового синього) і помістити у скляну
трубочку.
3. Трубочку запаюють на полум’ї газової
горілки.
4. Трубочки вміщують у стерилізаційні
коробки разом із матеріалом, що
стерилізується. Якщо температура в
Практикум з мікробіології 22
стерилізаційній камері сягає певного рівня,
то хімічна речовина в трубочці
розплавляється, змішується з барвником і
забарвлюється в його колір.
Увага! Нині випускають паперові індикатори
стерилізації, які змінюють забарвлення за
певної температури: 1С — 120, 1С — 132 °С
та ін.
Послідовність дій «При
контролі за якістю стерилізації
за допомогою біологічних
тестів».
1. Підготувати тест-культуру (мікроорганізми з
групи антракоїдів, які витримують кип’ятіння
протягом 25—30 хв і вплив текучої пари
температурою 100 °С протягом 4—6 хв) або
зразки ґрунту, що містять спори
термостабільних сапрофітів (витримують
температуру 120 °С протягом 2—3 хв).
2. Помістити у стерилізатор щонайменше 5
біотестів (у різних його місцях).
3. Один (контрольний тест) залишають за
кімнатної температури.
4. Після стерилізації змиви з біотестів
засівають на поживні середовища.
5. У змивах з тих біотестів, що перебували в
стерилізаторах, росту культури не повинно
бути,
6. Якщо з’являється ріст культури у змивах,
взятих із тестів, що перебували в
стерилізаторі, перевіряють технічний стан
апарата.
7. У змивах з контрольного тесту — рясний ріст
культури.
Увага! Біотести використовують у парових
стерилізаторах і дезінфекційних камерах
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
8. Взяття слизу із зіва і носа для бактеріологічного
дослідження.
Оснащення
Послідовність дій Алгоритм “Взяття патологічного матеріалу ватним тампоном з носа”:
— запропонуйте пацієнту сісти обличчям до світла;
— підпишіть на пробірці тампона номер аналізу;
— візьміть тампон у праву руку, звільніть його від пробірки;
9. зробіть огляд носових ходів (чи немає пошкоджень слизової оболонки);
—- уведіть тампон у носовий хід до кінця ходу;
Увага! Не можна торкатися тампоном зовнішньої поверхні носа.
10. зберіть слиз зі стінок одного носового ходу, добре притискуючи тампон;
11. зберіть слиз зі стінок другого носового ходу цим самим тампоном, не
обертаючи його навколо осі;
— опустіть тампон у пробірку.
Практикум з мікробіології 23
Алгоритм “Взяття патологічного матеріалу ватним тампоном із зіва”:
Увага! Під час взяття патологічного матеріалу дотримуйтеся правил
асептики та техніки безпеки.
12. поставте в штатив дві пробірки зі стерильними тампонами;
13. проведіть маркірування пробірок (поставте номер, “З” і “Н”);
14. запропонуйте пацієнту сісти проти джерела світла, відкинути голову
назад і широко відкрити рот;
15. візьміть тампон “З” у праву руку, звільніть його від пробірки;
16. візьміть стерильний шпатель у ліву руку, притисніть ним корінь язика;
17. зберіть матеріал обертальними рухами, злегка натискуючи на тампон, з
мигдаликів, дужок піднебіння, язичка і задньої стінки глотки;
18. виведіть тампон із зіва, не торкаючись тампоном язика, слизової
оболонки щік та зубів;
19. опустіть тампон у пробірку;
Увага! Алгоритм “Взяття патологічного матеріалу ватним тампоном із
носа” див. практичне заняття 3, завдання 5.
— скріпіть дві пробірки одного пацієнта гумовим кільцем, покладіть у
лоток.
Примітка. Тампоном, яким був відібраний матеріал із зіва, можна робити
посіви для виявлення і стафілококів, і стрептококів.
Алгоритм “Взяття носоглоткового слизу за підозри па менінгококову
інфекцію”:
— запропонуйте пацієнту сісти обличчям до джерела світла;
— візьміть із штативу у ліву руку пробірку з тампоном, напишіть на
пробірці номер аналізу;
— вийміть правою рукою із пробірки тампон, зігніть його об край отвору
пробірки під кутом 135° на відстані 2—3 см від кінця;
Увага! Щоб не допустити розтріскування скла пробірки і травми рук,
великий палець лівої руки тримайте на краю отвору пробірки, а великим
пальцем правої руки натисніть на дріт тампона!
20. поставте у штатив пробірку, зігнутий тампон тримайте у правій руці;
21. візьміть у ліву руку стерильний шпатель для зіва;
22. запропонуйте пацієнту відкрити широко рота;
23. натисніть шпателем на корінь язика;
24. уведіть тампон зігнутим кінцем догори за м’яке піднебіння в носоглотку,
проведіть 2—3 рази тампоном по задній стінці глотки;
Увага! Під час введення і виведення тампон не повинен торкатися зубів,
слизової оболонки щік, язика і язичка!
— виведіть тампон із ротової порожнини, опустіть його у пробірку,
розгинаючи тампон об край пробірки;
Увага! Якщо тампон потрібно відправити до лабораторії, то перед
взяттям матеріалу його зволожують. Якщо матеріал відбирається сухим
тампоном, то його опускають у середовище накопичення.
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
1. Взяття крові для бактеріологічного дослідження та його
первинний посів.
Практикум з мікробіології 24
Оснащення
Послідовність дій
Посев крови лучше всего делать в начальном периоде болезни или в
разгаре, сразу после озноба (наиболее выраженная бактериемия). Посев
крови производится на жидкие питательные среды — сахарный,
сывороточный, желчный бульон и др. Состав среды выбирается в
зависимости от биологических особенностей возбудителя
предполагаемой у больного инфекции. Чтобы избежать влияния
бактерицидных свойств крови, ее необходимо разводить большим
количеством среды,
примерно в
отношении 1:10.
Обычно берут
10— 20 мл крови
и засевают в колбу,
содержащую 90— 180
мл среды.
Переливать кровь из
шприца в колбу
надо над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу. Колбу с
посевом направляют в лабораторию, а вечером и ночью помещают в
термостат. При отсутствии питательной среды кровь собирают в
стерильную пробирку с соблюдением таких же правил.
1. Алгоритм Взяття патологічного матеріалу для
дослідження з ураженої ділянки шкіри.
Оснащення
Послідовність дій
Практикум з мікробіології 25
1. ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
Виготовлення мазка з тампону.
Алгоритм
Оснащення фізіологічний розчин, предметні скельця,
банка з ватою, фільтрувальний папір для
висушування препарату, пакетики зі
стерильною ватою
Послідовність дій 1. Підготуйте предметне скельце (протріть
насухо, підпишіть номер).
2. Вимийте руки з милом.
3. Зробіть тампон із стерильної вати.
4. Візьміть у себе тампоном наліт із зубів
(на межі зубів і ясен).
5. Зробіть мазок на предметному скельці.
6. Тампон опустіть у дезінфікаційний
розчин.
7. Висушіть мазок на повітрі.
8. Нанесіть на мазок каплю етилового
спирту (хімічна фіксація мазка).
9. Змийте мазок дистильованою водою
через 10-15 хвилин.
10.Висушіть на повітрі.
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
Взяття перев’язувального та хірургічного матеріалу на
визначення стерильності тощо
Оснащення
Підготовка медсестри Ретельно вимити і продезінфікувати
руки
Увага! Стерильний матеріал відбирають в
асептичних умовах.
Послідовність дій при «Взятті
перев’язувального та хірургічного
матеріалу на визначення
стерильності тощо»
1. Від великих об’єктів (бинти,
простирадла, шовний матеріал)
відрізають стерильними
ножицями невеликі шматочки
(3-5 см).
2. Серед дрібних предметів ( голки
Практикум з мікробіології 26
та інш.) — відбирають по
декілька штук стерильним
пінцетом з різних місць біксу.
3. З хірургічного інструментарію
та іншого обладнання роблять
змиви стерильними серветками,
змоченими стерильним
ізотонічним розчином натрію
хлориду.
4. Змиви з усіх відібраних об’єктів
засівають на поживні
середовища.
5. Дрібні об’єкти занурюють у
поживне середовище.
6. З метою самоконтролю посів
проводять на одне поживне
середовище у дві паралельні
пробірки.
7. Для виявлення анаеробів ви-
користовують тіогліколеве
середовище, яке інкубують за 32
°С протягом 8 діб.
8. Для виявлення грибів
використовують середовище
Сабуро, яке інкубують за 22 °С
протягом 8 діб.
9. Матеріал вважають стерильним,
якщо в усіх посівах відсутні
ознаки росту мікроорганізмів.
Алгоритм Взяття матеріалу для лабораторного
дослідження при бактеріальних, вірусних, грибкових
інфекціях тощо
Оснащення
Послідовність дій Алгоритм “Взяття назофарингеальних зразків при гострій
респіраторній вірусній інфекції”:
— поставте у штатив 1 пробірку з розчином Хенкса і 2 пробірки із
сухими стерильними тампонами;
-— підпишіть на пробірках (з розчином Хенкса) номер аналізу, на
тампонах — номер аналізу та місце взяття матеріалу: “Н” (ніс) чи “З”
(зів);
— запропонуйте хворому звільнити ніс від слизу;
уведіть тампон у порожнину носа хворого на глибину 2—3 см і, натискаючи із
зусиллям на зовнішню стінку носа, обертовим рухом зніміть десквамований
епітелій;
25. уведіть цей тампон в інший носовий хід і візьміть матеріал таким самим
способом;
26. опустіть тампон у розчин Хенкса, ретельно його відмийте і відіжміть об
стінки пробірки; закрийте її пробкою;
27. тампон помістіть у пробірку, на якій зазначено “Н”;
28. запропонуйте хворому широко відкрити рота;
Практикум з мікробіології 27
29. натисніть стерильним шпателем на корінь язика;
30. візьміть другим тампоном матеріал із задньої стінки глотки;
31. опустіть тампон у ту саму пробірку з розчином Хенкса, відмийте його і
відіжміть об стінки цієї пробірки; тампон опустіть у пробірку, на якій
зазначено “З”; закрийте її пробкою;
32. заклейте пробку і верхню частину пробірки із середовищем Хенкса
клейкою стрічкою;
33. заповніть направлення.
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
1. Транспортування інфікованого (заразного) матеріалу до
лабораторії.
Оснащення
Послідовність дій
Алгоритм “Підготовка матеріалу до транспортування”:
— відкрийте бікс;
— покладіть на дно бікса серветку з адсорбівного матеріалу, бавовняну або
бязеву пелюшку;
— покладіть на серветку пробірки з тампонами;
— закрийте пробірки з тампонами кінцями серветки;
— закрийте бікс;
— складіть направлення у поліетиленовий пакет чи папку.
Алгоритм “Підготовка матеріалу для транспортування до лабораторії”:
34. помістіть пробірку разом із шматочком вати у пластико-вий пакет
меншого розміру;
35. помістіть зразок від одного обстежуваного у пластиковий пакет більшого
розміру;
36. помістіть пакети у термоізолюючий контейнер, обкладіть їх ватою;
37. закрийте щільно контейнер, заклейте кришку і верхню частину
контейнера клейкою стрічкою;
38. покладіть направлення в окремий пластиковий пакет, прикріпіть його до
контейнера.
Практикум з мікробіології 28
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
1. Проведення орієнтовної реакції аглютинації.
Оснащення
Послідовність дій
Алгоритм “Проведення та облік результатів орієнтовної Р А”:
39. знежирте предметне скло, нанесіть маркером три кола
діаметром близько 1 см на однаковій відстані одне від одного,
скло переверніть;
40. підпишіть: під І колом — Д (дослід), під II — КС (контроль
сироватки), під III — КА (контроль антигену), зазначте номер
аналізу;
41. зафламбуйте предметне скло, покладіть його у кришку чашки
Петрі;
42. нанесіть пастерівською піпеткою на кола Д і КС по 1 краплі
аглютинуючої сироватки, на коло КА — 1 краплю ізотонічного
розчину натрію хлориду;
43. розітріть і змішайте бактеріологічною петлею досліджувану
культуру з краплею ізотонічного розчину натрію хлориду (КА);
44. змішайте досліджувану культуру з краплею сироватки (Д);
45. оцініть результати через 1—3 хв;
— помістіть предметне скло в дезінфекційний розчин.
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
Оформлення супровідної документації
Оснащення
Послідовність дій
Практикум з мікробіології 29
Алгоритм ПРАКТИЧНА НАВИЧКА
« Підготовка лабораторного посуду, медичного
інструментарію, перев’язувального і хірургічного
матеріалу до стерилізації та їх стерилізація».
Оснащення Вимитий і висушений посуд,пакувальний папір,
марля, гумові кільця, шпагат, вата, ножиці,
пінцети, скальпелі.
Послідовність дій при
«Підготовці чашок Петрі до
стерилізації»
1. Розстеліть на столі аркуш щільного паперу
(розміром приблизно 40Х40).
2. Складіть чашки Петрі стовпчиком в
одному напрямі (дном догори) – 10шт.
3. Покладіть на аркуш паперу цей стовпчик
чашок набік і щільно загорніть папером
(подібно до бандеролі).
4. Перевяжіть шпагатом.
5. Підпишіть на папері дату стерилізації.
Послідовність дій при
«Підготовці піпеток до
стерилізації»
1. Наріжте смужки паперу розміром 2-2,5х50
-70 см.
2. Вставте у верхню частину піпеток
шматочки вати, ворсинки вати спаліть у
полум’ї спиртівки.
3. Загорніть щільно кожну піпетку в смужку
паперу розміром приблизно 20х40 см.
4. Складіть загорнуті піпетки на цей аркуш в
одному напрямку.
5. Загорніть усі піпетки в цей аркуш паперу.
6. Закріпіть кінці гумовими кільцями.
7. Підпишіть на папері об’єм піпеток,
кількість їх, дату стерилізації.
Послідовність дій при
«Підготовці пробірок до
стерилізаці
1. Розсортуйте пробірки за об’ємом.
2. Підготуйте ватно-марлеві пробки.
3. Закрийте щільно пробками отвори
пробірок.
Увага! Пробки підбирайте так, щоб 2/3 пробки
знаходились у пробірці, а 1/3 – поза пробіркою.
Пробка повинна щільно прилягати до стінок
пробірки. Якщо не дотримуватися цих правил,
пробки легко випадають із пробірок. Це
Практикум з мікробіології 30
призводить до того, що пробірки втрачають
стерильність.
4.Звяжіть шпагатом по декілька пробірок (5;
10; 15).
5.Напишіть на листочку паперу (3х3 см)
дату стерилізації.
6.Підведіть цей папірець під шпагат на
пробірках.
Послідовність дій при
«Підготовці флаконів до
стерилізації»
1. Закрийте флакони ватно-марлевими
пробками.
2. Надіньте на флакони поверх пробки
паперовий ковпачок.
3. Закріпіть ковпачок на флаконі гумовим
кільцем.
4. Обріжте ножицями гострі кінці
ковпачка.
5. Напишіть на папері ковпачка дату
стерилізації.
Увага! Скляний посуд стерилізують у сухо жаровій
печі за температури 180С протягом 60 хв.
Або за температури 160С – 150 хв; у
паровому стерилізаторі за температури
130С – 20-30 хв.
Послідовність дій при
«Підготовці марлі, вати,
інструментів до стерилізації»
1. Наріжте марлю за необхідними розмірами.
2. Загорніть у щільний пакувальний папір
пакети з марлею, в інший – пакети з ватою.
3. Напишіть на пакувальному папері вид
матеріалу, кількість, дату стерилізації.
Увага! Марлю, вату стерилізують у сухо жаровій
шафі за температури 160С 150хв або в
паровому стерилізаторі за температури
120С – 30хв.
Послідовність дій при
«Підготовці до стерилізації
інструментів»
1. Загорніть у щільний пакувальний папір
одну одиницю інструментів.
2. Напишіть на пакувальному папері дату
стерилізації.
Увага! Металеві інструменти (ножниці,
скальпелі, пінцети) готують до
стерилізації однаково.
Практикум з мікробіології 31
Увага! Металеві інструменти стерилізують у
сухо жаровій шафі за температури 160С
150хв, 180С – 60хв., або в паровому
стерилізаторі за температури 120С – 20-
30хв., 132С – 30-60хв. Залежно від того,
якою культурою (аспорогенною чи
спорогенною) вони були забруднені. Посуд,
інструменти й інші матеріали, загорнуті
в щільний папір , мають термін зберігання
30 діб після стерилізації, не загорнуті
посуд і інструменти можуть бути
використані протягом поточного
робочого дня.
Алгоритм
Оснащення
Послідовність дій